برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده پایان نامه درج نمیشود
(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)
تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :
(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)
فهرست مطالب:
چکیده فارسی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………1
فصل اول: مقدمه وکلیات
1-1) ناباروری…………………………………………………………………………………………………………………………………………………..3
2-1) دستگاه تولید مثل نر در پستانداران……………………………………………………………………………………………………………..5
3-1) آناتومی بیضه ها………………………………………………………………………………………………………………………………………..6
.4-1) اجزای تشکیل دهنده بیضه………………………………………………………………………………………………………………………..6
1-4-1) سلول های سری اسپرماتوژنز………………………………………………………………………………………………………………….7
2-4-1) سلول های پشتیبان یا سرتولی………………………………………………………………………………………………………………..7
5-1) بافت بینابینی…………………………………………………………………………………………………………………………………………….9
6-1) مجاری تناسلی داخل بیضه…………………………………………………………………………………………………………………………9
1-6-1)لوله های مستقیم……………………………………………………………………………………………………………………………………9
2-6-1) شبکه بیضه یا شبکههالر………………………………………………………………………………………………………………………9
3-6-1)مجاری آوران………………………………………………………………………………………………………………………………………10
4-6-1) مجرای اپی دیدیم………………………………………………………………………………………………………………………………..10
5-6-1) مجرای وابران……………………………………………………………………………………………………………………………………..10
6-6-1)مجرای انزالی……………………………………………………………………………………………………………………………………….11
7-1) غدد ضمیمه دستگاه تناسلی……………………………………………………………………………………………………………………..11
1-7-1)کیسه منی……………………………………………………………………………………………………………………………………………10
2-7-1) پروستات……………………………………………………………………………………………………………………………………………11
3-7-1) -غدد پیازی پیشابراهی………………………………………………………………………………………………………………………..12
8-1) اسپرماتوژنز……………………….. ………………………………………………………………………………………………………………..12
اسپرماتوسیتوژنز…………………………………………………………………………………………………………………………………12 1-8-1)
2-8-1) میوز………………………………………………………………………………………………………………………………………………….13
3-8-1)اسپرمیوژنز…………………………………………………………………………………………………………………………………………..13
9-1)مورفولوژی اسپرم……………………………………………………………………………………………………………………………………14
1-9-1)سر اسپرم…………………………………………………………………………………………………………………………………………..14
2-9-1) دم اسپرم…………………………………………………………………………………………………………………………………………..15
10-1)ارزیابی مورفولوزی اسپرم………………………………………………………………………………………………………………………16
11-1)تنظیم هورمونی اسپرماتوژنز…………………………………………………………………………………………………………………….16
12-1)ظرفیت یابی و واکنش آکروزومی اسپرماتوزوئیدها……………………………………………………………………………………..17
13-1)تستوسترون و سایر هورمون های جنسی نر……………………………………………………………………………………………….18
14-1) تنظیم ترشح تستوسترون………………………………………………………………………………………………………………………..19
15-1) آثار مختلف آندروژن ها……………………………………………………………………………………………………………………….19
16-1)تجزیه و دفع تستسترون………………………………………………………………………………………………………………………….20
17-1) -فعالیت های بیولوژیکی در تولید مثل……………………………………………………………………………………………………21
18-1) سیکل استروس……………………………………………………………………………………………………………………………………21
19-1) اوولاسیون……………………………………………………………………………………………………………………………………………21
20-1)حاملگی……………………………………………………………………………………………………………………………………………….22
21-1) دوره حاملگی……………………………………………………………………………………………………………………………………….22
22-1) سیکلوسپورین………………………………………………………………………………………………………………………………………22
23-1)تاریخچهی وساختمان شیمیایی سیکلوسپورین- آ………………………………………………………………………………………….22
24-1) مکانیسم عمل سیکلوسپورینآ در بدن………………………………………………………………………………………………………24
25-1)کاربرد های بالینی و عوارض…………………………………………………………………………………………………………………..25
26-1) استرس اکسیداتیو و پیامدهای آن در دستگاه تولید مثلی نر…………………………………………………………………………25
آنتی اکسیدانت ها و نقش حفاظتی آنها در برابر استرس اکسیداتیو………………………………………………………………28 27-1)
28-1) آنزیم سوپراکسید دیسموتاز(SOD…………………………………………………………………………………………………………30
29-1)آنزیم کاتالاز…………………………………………………………………………………………………………………………………………31
30-1) آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز…………………………………………………………………………………………………………………….31
31-1) آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز……………………………………………………………………………………………………………………….31
32-1) مکانیسمهای پاسخ سلولی به استرس……………………………………………………………………………………………………..31
1-32-1) ترمیم و باز سازی DNA………………………………………………………………………………………………………………..32
33-1) مسیرهای ترمیم DNA………………………………………………………………………………………………………………………..32
34-1) مکانیسم های دفاع آنتی اکسیدانتی………………………………………………………………………………………………………….33
35-1)زالزالک………………………………………………………………………………………………………………………………………………34
1-35-1) خصوصیات فیتوشیمیایی ………………………………………………………………………………………………………………..34
2-35-1) ویژگیهای داروشناختی………………………………………………………………………………………………………………….34
1-2-36-1) اثرات حفاظتی بر روی سیستم قلبی و عروقی………………………………………………………………………………. 33
2-2-35-1) خاصیت کاهندگی چربی خون……………………………………………………………………………………………………..35
3-2-35-1) اثرات آنتی اکسیدانتی………………………………………………………………………………………………………………….35
36-1)عصاره هسته انگور……………………………………………………………………………………………………………………………..36
37-1) تولیدمثل در موشهای صحرایی…………………………………………………………………………………………………………..38
1-37-1) بلوغ…………………………………………………………………………………………………………………………………………….38
2-37-1) 14700 تومانرفتاری تولیدمثلی…………………………………………………………………………………………………………………………….38
3-37-1) دستگاه تولیدمثلی موشهای صحرایی نر………………………………………………………………………………………….39
38-1) تولید جنین در شرایط In vitro………………………………………………………………………………………………………..41
39-1) ظرفیت پذیری اسپرم………………………………………………………………………………………………………………………. 41
40-1) لقاح آزمایشگاهی(IVF)…………………………………………………………………………………………………………………..42
41-1) مروری بر مطالعات انجام گرفته برروی داروی سیکلوپورین، عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور…………44
فصل دوم : مواد و روشها
1-2) مواد………………………………………………………………………………………………………………………………………………….46
2-2) وسایل و دستگاهها…………………………………………………………………………………………………………………………….46
3-2) آماده سازی عصاره های آبی…………………………………………………………………………………………………………………47
1-3-2) تهیهی عصاره هسته انگور……………………………………………………………………………………………………………………47
2-3-2) طرز تهیهی عصاره زالزالک………………………………………………………………………………………………………………….48
4-2) گروه بندی حیوانات……………………………………………………………………………………………………………………………48
5-2) تعیین حیوانات و دوز موثر دارو……………………………………………………………………………………………………………48
6-2) گروه بندی حیوانات…………………………………………………………………………………………………………………………….49
7-2) برریس های بافت شناسی…………………………………………………………………………………………………………………….49
8-2) روش تهیهی محلول ثبوتی فرمالین……………………………………………………………………………………………………………50
9-2) پاساژ بافتی………………………………………………………………………………………………………………………………………….50
1-9-2) آبگیری…………………………………………………………………………………………………………………………………………..50
2-9-2) شفاف سازی……………………………………………………………………………………………………………………………………50
3-9-2) نفوذ و آغشتگی……………………………………………………………………………………………………………………………….51
4-9-2) قالب گیری……………………………………………………………………………………………………………………………………..51
5-9-2) برش بافت و ثابت کردن مقاطع بافتی بر روی لام……………………………………………………………………………….. 52
6-9-2)طرز تهیهی چسب آلبومین……………………………………………………………………………………………………………………..52
10-2) رنگ امیزی مقاطع بافتی……………………………………………………………………………………………………………………… 52
11-2) رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین……………………………………………………………………………………………………….53
1-11-2) طرز تهیهی اسید الکل…………………………………………………………………………………………………………………………54
2-11-2) طرز تهیهی رنگ ائوزین…………………………………………………………………………………………………………………….. 54
3-11-2) طرز تهیهی رنگ هماتوکسیلین هاریس…………………………………………………………………………………………………..54
12-2) ارزیابی هیستو مورفومتریک بیضه…………………………………………………………………………………………………………..55
13-2) آماده سازی موش برای IVF ………………………………………………………………………………………………………………55
2-20-2) آماده سازی محیط کشت برای IVF …………………………………………………………………………………………..56
2-13-2) طرز تهیهی محیط کشت mR1ECM……………………………………………………………………………………………56
3-13-2) تهیهی اسپرم…………………………………………………………………………………………………………………………………57
4-13-2) روش گرفتن تخمک بالغ و لقاح داخل آزمایشگاهی(IVF)…………………………………………………………….57
14-2) ارزیابی رشد جنین ها……………………………………………………………………………………………………………………..58
15-2) ارزیابی اسپرماتوژنز در بافت بیضه…………………………………………………………………………………………………….59
16-2) ارزیابی خصوصیات اسپرم ها……………………………………………………………………………………………………………59
1-16-2) نحوه استحصال اسپرم از اپیدیدم…………………………………………………………………………………………………..59
2-16-2) بررسی تحرک در اسپرماتوزوئیدها……………………………………………………………………………………………….60
3-16-2)شمارش اسپرمها………………………………………………………………………………………………………………………..60
17-2) ارزیابی قابلیت زنده ماندن و مورفولوژی اسپرمها ……………………………………………………………………………..60
۱8-2 ) بررسی وضعیت بلوغ هسته اسپرم: رنگ آمیزی آنیلین بلو (AB)………………………………………………………. 61
19-2) بررسی DNA شکسته و یا تک رشتهییی ای: رنگ آمیزی آکریدین اورانژ (AO)…………………………………… 61
20-2) مطالعات هیستوشیمیایی بیضه………………………………………………………………………………………………………..62
1-20-2) رنگ آمیزی پریودیک اسید شیف (PAS)……………………………………………………………………………….62
2-20-2)رنگ آمیزی سودان بلک…………………………………………………………………………………………………………….62
3-20-2) بررسی هیستوشیمیایی فعالیت آنزیم الکالین فسفاتاز ……………………………………………………………………62
21-2) آنالیز و تحلیل دادهها………………………………………………………………………………………………………………….63
فصل سوم نتایج ویافته ها
1-3) نتایج حاصل از پارامترهای مختلف اسپرم……………………………………………………………………………………………64
1-1-3) نتایج حاصل از شمارش اسپرم در اپی دیدیم………………………………………………………………………………….64
2-1-3) نتایج حاصل از مطالعهی میزان اسپرم زنده………………………………………………………………………………………..65
3-1-3) نتایج حاصل از شمارش اسپرم های نابالغ………………………………………………………………………………………66
4-1-3) نتایج حاصل از مطالعهی کروماتین اسپرم………………………………………………………………………………………….67
2-3) نتایج حاصل از مطالعهی پارامترهای مختلف لقاح (IVF)………………………………………………………………………70
1-2-3) نتایج حاصل از تعداد اووسیت های لقاح یافته در گروههای مختلف آزمایش…………………………………….70
2-2-3) نتایج حاصل از تعداد جنین های دو سلولی…………………………………………………………………………………….71
3-2-3) نتایج حاصل از تعداد بلاستوسیست……………………………………………………………………………………………….72
4-2-3)نتایج حاصل از تعداد جنین های ارست شده…………………………………………………………………………………….73
5-2-3) نتایج حاصل از تعداد جنین های تیپ 1………………………………………………………………………………………… 74
6-2-3)نتایج حاصل از جنین های تیپ 2……………………………………………………………………………………………………75
6-2-3) تنایج حاصل از تعداد جنین های تیپ 3………………………………………………………………………………………….76
4-3)نتایج بخش هیستوشیمیایی………………………………………………………………………………………………………………….80
1-4-3) نتایج مربوط به رنگ آمیزی PAS ……………………………………………………………………………………………….. 81
2-4-3)نتایج مربوط به رنگ آمیزی Sudan Black …………………………………………………………………………………..82
3-4-3) بررسی آلکالین فسفاتاز بافتی……………………………………………………………………………………………………………83
5-3) نتایج حاصل از هیستومورفومتری بیضه………………………………………………………………………………………………….84
1-5-3)نتایج حاصل از اندازهی گیری قطرلوله های سمینیفر و ضخامت اپی تلیوم لوله های ………………………………….84
2-5-3) نتایج حاصل از اندازهی گیری تعداد سلول های لیدیگ بیضه………………………………………………………..86
3-5-3) نتایج حاصل از اندازهی گیری تعداد سلولهای لنفاوی تک هستهای………………………………………………87
6-3) نتایج حاصل ازاندازهی گیری ارزیابیهای اسپرماتوژنز……………………………………………………………………..87
1-6-3) نتایج حاصل ازاندازهی گیری ضریب میوزی و ضریب بازسازی ……………………………………………………88
2-6-3) نتایج حاصل از اندازهی گیری ضریب تمایز لولهای………………………………………………………………………89
3-6-3) نتایج حاصل از اندازهی گیری ضریب سلول سرتولی…………………………………………………………………..90
فصل چهارم : بحث ونتیجه گیری
بحث ونتیجه گیری …………………………………………………………………………………………………………………………..92
پیشنهادات……………………………………………………………………………………………………………………………………….102
منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………..103
چکیده
سیکلوسپورین A از یک مولکول پپید حلقوی خنثی دارای یازده اسید آمینه باوزن مولکولی 1201دالتون با خاصیت هیدروفوبی تشکیل شده است که به عنوان یک عامل سرکوب کنندهی سیستم ایمنی در پیوند عضو مورد استفاده قرار می گیرد. عصاره آبی زالزالک و هسته انگور از گیاهان دارویی می باشند که به سبب دارا بودن ویژگی های دارویی متعدد از جمله خواص آنتی اکسیدانتی مورد توجه بسیار قرار گرفته اند.این مطالعهی به منظور ارزیابی کارایی عصاره آبی زالزالک و هسته انگورکه دارای فعالیت آنتی اکسیدانتی می باشند، به عنوان ترکیبات محافظ در برابر مسمومیت بیضه ناشی از داروی سیکلوسپورین آ بر روی سیستم تولید مثلی رت نر صورت پذیرفت. برای انجام این این مطالعهی تعداد 32 رت نر نژاد ویستار با میانگین وزنی 20± 200 گرم متعاقب یک هفته سازگاری با شرایط محیطی جدید بهصورت تصادفی به چهار گروه تقسیم شدند (کنترل، سیکلوسپورینآ، سیکلوسپورین و عصاره آبی زالزالک، سیکلوسپورین و عصاره آبی هسته انگور). سه گروه از موش ها داروی سیکلوسپورین را با دوز mg/kg/day40 بهصورت محلول در نیم میلی لیتر روغن کنجد روزانه دریافت مینمود. دو گروه از گروههای فوق عصاره آبی زالزالک و روغن هسته انگور را با دوز mg/kg/day150دریافت کردند. بعد از روزهای 25 و 45 در تمام گروهها رت ها آسانکشی و کالبد گشایی شدند ، بیضه ها واپی دیدیم ها جداسازی شدند. به دنبال ارزیابی خصوصیات اسپرم، میزان باروری آزمایشگاهی(IVF) ، تغییرات مورفولوژیک و مورفومتریک، شاخص اسپرماتوژنز، میزان کربوهیدرات ها و چربی ها و نیز فعالیت آنزیم آلکالین فسفاتاز مورد ارزیابی قرار گرفت. گروهی از رت ها که داروی سیکلوسپورینآ را دریافت کرده بودند (بمدت 25 و 45 روز) کاهش معنی داری (P<0.05) در شاخص های اسپرماتوژنز (ضریب سلول سرتولی و ضریب میوزی)، پارامترهای استریولوژیک (قطر و ارتفاع اپی تلیوم، تعداد سلول های لیدیگ) به همراه تغییرات مورفولوژیک در بافت بیضه شامل آتروفی لوله های منی ساز، کاهش تعداد سلول های زایا، افزایش تعداد ماست سل هاو افزایش فضای بینابینی در بافت همبند بینابینی را نشان دادند. سلول های اسپرماتوژنیک در موشهای تحت درمان با سیکلوسپورین آ واکنش ضعیفی نسبت به رنگ آمیزی PAS، واکنش بالایی نسبت به رنگ آمیزی با سودان بلک و آلکالین فسفاتاز نشان دادند. علاوه بر این تجویز داروی سیکلوسپورین کاهش معنیدار درتعداد اسپرم ها (P<0.05) و افزایش معنیدار اسپرم های مرده و غیرطبیعی و اسپرم های با کروماتین آسیب دیده را موجب گردید. حال آنکه درمان همزمان با عصاره آبی گیاه زالزالک و هسته انگور بهبود قابل ملاحظه ای را در پارامترهای مذکور سبب گردید. یافته های بدست آمده از این مطالعهی نشان می دهد که داروی سیکلوسپورین آ به واسطه اعمال استرس اکسیداتیو میتواند موجبات آسیب بافت بیضه را فراهم آورد، درحالی که عصاره ابی گیاه زالزالک و روغن هسته انگور به سبب دارا بودن قابلیت مهار رادیکال های آزاد و فرآیند های اکسیداتیو می توانند به گونه ای موثر در برابر واکنش های ناخواسته ناشی از این دارو نقش ایفا کند. آنها همچنین باعث بهبود روند رشد جنینی، کیفیت جنین ها و سبب افزایش درصد اووسیت های لقاح یافته، جنین های دو سلولی، بلاستوسیستها و کاهش توقف جنینی و افزایش میزان شکافتگی و بهبود مورفولوژی جنین های کشت داده شده گردید (P<0.05).
مقدمه
1-1) ناباروری
ناباروری مشکلی است که هماکنون بسیاری از زوجها را درگیر میکند و موجب از هم پاشیدگی بسیاری از خانوادهها میشود و به عنوان یک بحران روانی، استرس زیادی را بر زوجهای نابارور وارد نموده و به طرق گوناگون سلامت روانی آنها را تهدید میکند.Freeman et al., 1985)). در ۱۰ درصد موارد ناباروری مردان، عدم وجود اسپرم در مایع انزال علت اصلی ناباروری میباشد (Matzuk and Lamb, 2007) .
اولین گام جهت بررسی و ارزیابی باروری و یا میزان سلامت تولیدمثلی مردان، تخمین پارامترهای اسپرمی توسط آنالیز مایع منی میباشد. آنالیز اسپرم شامل محاسبه تراکم، درصد تحرک و بررسی مورفولوژی اسپرم میباشد. حداقل میزان این پارامترها در باروریهای طبیعی، از طریق بررسی پارامترهای اسپرمی در زوجهای بارور، توسط سازمان بهداشت جهانی بهصورت دورهای اعلام میشود. با توجه به اینکه مقادیر طبیعی اعلام شده توسط سازمان بهداشت جهانی از طریق بررسی جمعیتهای بارور تعیین میشود، در مواردی که پارامترهای اسپرمی در دامنه مقادیر طبیعی قرار نگیرند، فرد نابارور محسوب میشود و متعاقب آن مشکلات اجتماعی و فشارهای روحی بسیاری برای زوجین بوجود میآید.
استفاده از برخی داروها در درمان بیماریها باعث اختلال تولید اسپرم و در نهایت منجر به عقیمی در مردان میشود (Dollery, 1999). پیدایش تکنیک جراحی پیوند اعضاء در پزشکی دریچه وسیعی برای نجات بعضی بیماران گشوده است که بدون شک افزایش طول عمر، بقا و سلامت این بیماران بعداز عمل پیوند متضمن استفاده از داروهای مهارکنندهی سیستم ایمنی[1] می باشد. امروزه مشکل اساسی در پیوند اعضا پیچیدگی محافظت سیستم ایمنی گیرنده عضو در مقابل واکنشهای ایمنی – تخریبی عضو بیگانه در بدن میباشد. در حال حاضر عوامل و داروهای سرکوبگر مختلفی نظیرکورتیکواستروئیدها، سیکلوسپورین، میکوفنولات موفتیل و اسپراگولین و یا عوامل سیتوتوکسیک نظیر آزاتیوپرین، سیکلوفسفامید حتی آنتی بادی ایمونوساپرسیو به منظور سرکوب سیستم دفاعی بدن گیرنده عضو مورد استفاده قرار میگیرند. از میان داروهای ذکر شده سیكلوسپورین از داروهای ایمونوساپرسور اصلی است كه در بیماران پیوند كلیه استفاده میشود.
سیكلوسپورین آ با افزایش سطح ترومبوكسانB2 ، فعالیت سیتوكرومP- 450 ، مالونیل دی آلدئید، لاكتات دهیدروژناز، گلیكولیك اكسیداز ، گزانتین اكسیداز و به دنبال آن تولید انواع رادیكالهای آزاد باعث ایجاد حالت نفروتوكسی و هپاتوتوكسی و غیره میشود. این اختلالات ممكن است به طور ثانوی منجر به تغییرات تخریبی و اختلال عمل كرد بیضه شوند (Adhirai and Selvam, 1998; Durak et al., 1998 ). عصارههای حاصل از قسمتهای مختلف گیاه زالزالک دارای اثرات آنتیاکسیدانی بوده و قادر به مهار آنیون سوپراکسید، رادیکال هیدروکسیل، پراکسیدهای هیدروژن و نیز پراکسیداسیون لیپیدی میباشند (Bahorun et al., 1996). فعالیتهای آنتی اکسیدانی و مهار رادیکال های آزاد نتیجه عملکرد ترکیبات فنلی و فلاونوئیدهای موجود در این گیاه میباشد (Zhang et al., 2001). عصاره هسته انگور دارای خاصیت آنتی اکسیدانتی و مهار فعالیت رادیکال های آزاد می باشد (Jayaprakasha et al., 2003). بسیاری از اثرات بهداشتی مفید عصاره هسته انگور به مهار خواص آنتی اکسیدانی و رادیکال های آزاد نسبت داده شده است (Faria et al., 2006). به دلیل اینکه عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور دارای خواص آنتیاکسیدانتی بوده و باعث مهار رادیکالهای آزاد و کم کردن تخریب سلولی میشوند در این تحقیق از آنها استفاده شده است.
هدف از این مطالعهی بررسی اثر عصاره هسته انگور سیاه و عصاره زالزالک بر روی تغییرات هیستوشیمی بیضه وتوان باروری (IVF) رتهای نر (Rat) تیمار شده با داروی سیکلوسپورین است.
تعداد صفحه : 134
قیمت : 17300تومان
