دانشگاه آزاد اسلامی
واحد همدان
دانشكدهی علوم پایه ، گروه زیست شناسی
پایان نامه برای دریافت درجه كارشناسی ارشد در رشته زیست شناسی جانوری
گرایش : سلولی تکوینی
عنوان :
بررسی اثرات عصاره هیدروالکلی افتیمون و قارچ گانودرما بر لاین سلولی MCF7 سرطان پستان و لاین سلولVero اپیتلیالی کلیه در محیط کشت انتخابی
استاد راهنما :
دکتر رحیم احمدی
استادان مشاور:
دکتر مینو محمودی
(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)
تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :
(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)
چکیده:
زمینه و هدف: مطالعات نشان میدهد که عصارههای گیاهان دارویی بر سلولهای سرطانی تاثیر گذار است. هدف اصلی این تحقیق، بررسی بررسی اثرات عصاره هیدروالکلی افتیمون و قارچ گانودرما بر لاین سلولی MCF7 سرطان پستان و لاین سلولVero اپیتلیالی کلیه در محیط کشت انتخابی است.
روش بررسی: لاین سلولی Vero اپیتلیالی کلیه و لاین سلولی MCF7 سرطان پستان انسانی در هفت گروه کنترل که تنها حاوی محیط کشت است، گروه تحت تاثیر با دوز پایین عصاره هیدروالکلی عصاره گیاه افتیمون، گروه تحت تاثیر با دوز متوسط عصاره هیدروالکلی عصاره گیاه افتیمون، گروه تحت تاثیر با دوز بالای عصاره هیدروالکلی عصاره گیاه افتیمون، گروه تحت تاثیر بادوز پایین عصاره هیدروالکلی عصاره قارچ گانودرما، گروه تحت تاثیر با دوز متوسط عصاره هیدروالکلی عصاره قارچ گانودرما، گروه تحت تاثیر با دوز بالای عصاره هیدروالکلی عصاره قارچ گانودرما گروه تقسیم شدند سپس جهت اندازه گیری مقدار اثر سمیت عصاره با بهره گرفتن از سنجش MTT باکمک دستگاه الایزاریدر مورد سنجش قرار گرفت. در نهایت داده ها با بهره گرفتن از روش آماری آزمون واریانس یکطرفه بین گروه ها مقایسه شدند.
نتایج: در لاینهای سلولی MCF7 و Vero تحت تاثیر دوز 10 میکروگرم/ میلیلیتر، 100 میکروگرم/ میلیلیتر، 1 میلیگرم/ میلیلیتر، 10 میلیگرم/ میلیلیتر عصاره افتیمون سبب کاهش زندهمانی لاینهای سلولی را نشان داد که دارای تفاوت معناداری (به ترتیب P<0.001، P<0.001، P<0.001 و P<0.001) نسبت به گروه کنترل دارد. لاینهای سلولی MCF7 و Vero تحت تاثیر دوز 10 میکروگرم/ میلیلیتر، 100 میکروگرم/ میلیلیتر و 10 میلیگرم/ میلیلیتر عصاره قارچ گانودرما سبب کاهش زندهمانی لاینهای سلولی را نشان داد که دارای تفاوت معناداری (به ترتیب P<0.001، P<0.001 و P<0.001) نسبت به گروه کنترل دارد اما در غلظت 1میلیگرم/ میلیلیتر عصاره قارچ گانودرما افزایش تکثیر لاینهای سلولی را نشان میدهد MCF7 و Vero که دارای تفاوت معناداری (به ترتیب P<0.001) نسبت به گروه کنترل دارد.
نتیجه گیری: این مطالعه نشان میدهد که عصارههای هیدروالکی افتیمون و قارچ گانودرما سبب کاهش تکثیر لاینهای سلولی MCF7 سرطان پستان و Vero اپیتلیال کلیه می شود لذا در استفاده از عصاره قارچ گانودرما در غلظت 1 میلیگرم/ میلیلیتر باید مورد توجه قرار گیرد.
کلمات کلیدی: لاین سلولی MCF7 سرطان پستان، لاین سلولی Vero اپیتلیال کلیه، افتیمون، قارچ گانودرما
فهرست مطالب
عنوان شماره صفحه
فصل اول: کلیات تحقیق
1-1- مقدمه و تعریف…………………………………………………………………………………………………………………..1
1-2- بیان مساله…………………………………………………………………………………………………………………………..2
1-2-1 گیاه افتیمون………………………………………………………………………………………………………………………2
1-2-2- قارچ گانودرما…………………………………………………………………………………………………………………3
1-3- فرضیات تحقیق…………………………………………………………………………………………………………………..4
1-4- پرسشهای تحقیق……………………………………………………………………………………………………………….5
1-5- اهداف تحقیق……………………………………………………………………………………………………………………..5
1-5-1- هدف کلی تحقیق…………………………………………………………………………………………………………….5
1-5-2- اهداف جزئی طرح…………………………………………………………………………………………………………..5
فصل دوم: مروری بر ادبیات تحقیق و پیشینه تحقیق
2-1- سرطان پستان………………………………………………………………………………………………………………………8
2-1-1- تعریف، شیوع در جهان و شیوع در ایران…………………………………………………………………………….8
2-1-2- مکانیسم سلولی و مولکولی ایجاد سرطان پستان………………………………………………………………..11
2-1-2-1- پروتوانکوژنها و انکوژنها…………………………………………………………………………………………11
2-1-2-2- ژنهای سرکوب کننده تومور………………………………………………………………………………………12
ادامه فهرست مطالب
عنوان صفحه
2-1-3- علل و عوامل موثر در ایجاد سرطان پستان………………………………………………………………………..13
2-1-3-1- علل و عوامل محیطی…………………………………………………………………………………………………13
2-1-3-1-1- ارتباط سن با زیست شناسی سرطان…………………………………………………………………………14
2-1-3-1-2- بافت چربی…………………………………………………………………………………………………………..15
2-1-3-1-3- استروژن و پروژسترون…………………………………………………………………………………………..15
2-1-3-1-4- گیرندههای استروژنی و پروژسترونی………………………………………………………………………..15
2-1-3-1-5- هورمون پرولاکتین…………………………………………………………………………………………………16
2-1-3-1-6- هورمون رشد شبه انسولین (Insulin Like Growgh Factor)……………………………………..16
2-1-3-1-7- هورمون Vascular Endothelial Growgh Factor (VEGF)……………………………………..17
2-1-3-1-8- ارتباط نژادهای مختلف با سرطان پستان……………………………………………………………………17
2-1-3-2- علل و عوامل ژنتیکی…………………………………………………………………………………………………18
2-1-4- روشهای درمانی سرطان پستان………………………………………………………………………………………22
2-1-4-1- پرتو درمانی………………………………………………………………………………………………………………22
2-1-4-2- درمانهای دارویی……………………………………………………………………………………………………..22
2-1-5- استفاده از گیاهان دارویی در درمان سرطان پستان………………………………………………………………22
2-2- سرطان سلول کلیه (Renal Cell Carcinoma RCC)……………………………………………………………..2
ادامه فهرست مطالب
عنوان صفحه
2-2-1- تعریف، شیوع در جهان و شیوع در ایران………………………………………………………………………….23
2-2-2- مکانیسم سلولی و مولکولی ایجاد سرطان کلیه…………………………………………………………………..25
2-2-2-1- انکوژنها………………………………………………………………………………………………………………….25
2-2-2-2- ژنهای ترمیم کننده……………………………………………………………………………………………………27
2-2-2-3- ژنهای مهارکننده تومور……………………………………………………………………………………………..28
2-2-2-4- مرگ برنامه ریزی شده (آپوپتوزیس)……………………………………………………………………………..29
2-2-3- علل و عوامل موثر در ایجاد سرطان کلیه…………………………………………………………………………..30
2-2-3-1- علل و عوامل محیطی…………………………………………………………………………………………………30
2-2-3-1-1- هورمون Vascular Endothelial Growgh Factor (VEGF)……………………………………..30
2-2-3-2- علل و عوامل ژنتیکی…………………………………………………………………………………………………30
2-2-4- روشهای درمانی سرطان کلیه…………………………………………………………………………………………31
2-2-5- استفاده از گیاهان دارویی در درمان سرطان کلیه…………………………………………………………………31
2-2-5-1- ارتباط مصرف میوه و سبزی با سرطان کلیه…………………………………………………………………..31
2-2-5-2- ارتباط عصاره الکلی سیاهدانه با لاین سلولی ACHN سرطان کلیه…………………………………..32
2-3- لاین سلولی MCF7…………………………………………………………………………………………………………..32
2-4- لاین سلولی Vero……………………………………………………………………………………………………………..33
2-1-3- افتیمون Cuscuta Pentagona………………………………………………………………………………………………………..35
ادامه فهرست مطالب
عنوان صفحه
2-1-3- قارچ گانودرماGanoderma Lucidum …………………………………………………………………………….36
2-2- پیشینه تحقیق…………………………………………………………………………………………………………………….38
فصل سوم: روش اجرای تحقیق
3-1- برنامه های پیش بینی شده مطالعاتی…………………………………………………………………………………………42
3-2- ابزارها و مواد مورد نیاز………………………………………………………………………………………………………43
3-2-1- ابزارها………………………………………………………………………………………………………………………….43
3-2-2-لاین سلولی و مواد مصرفی………………………………………………………………………………………………43
3-3- گروه بندی………………………………………………………………………………………………………………………..49
3-4- برنامه اجرایی و سنجش……………………………………………………………………………………………………..50
3-4-1- طریقه تهیه عصاره گیاه افتیمون و قارچ گانودرما………………………………………………………………..50
3-4-2- برنامه اجرایی و سنجشها………………………………………………………………………………………………51
3-4-2-1- پاساژ لاین سلولی………………………………………………………………………………………………………51
3-4-2-2- انجماد لاین سلولی…………………………………………………………………………………………………….52
3-4-2-2-1- روش کار……………………………………………………………………………………………………………..53
3-4-2-2-2- ذوب لاین سلولی منجمد……………………………………………………………………………………….54
3-4-2-3- شمارش سلولی…………………………………………………………………………………………………………55
ادامه فهرست مطالب
عنوان صفحه
3-4-2-4- تست MTT……………………………………………………………………………………………………………..56
3-4-2-4-1- مراحل انجام MTT………………………………………………………………………………………………..58
فصل چهارم: تجزیه و تحلیل داده ها
4-1- اثر عصاره افتیمون بر لاین سلولی MCF7 سرطان پستان…………………………………………………………62
4-2- اثر عصاره افتیمون بر لاین سلولی Vero اپیتلیال کلیه…………………………………………………………..64
4-3- اثر عصاره قارچ گانودرما بر لاین سلولی MCF7 سرطان پستان……………………………………………….66
4-4- اثر عصاره قارچ گانودرما بر لاین سلولی Vero اپیتلیال کلیه………………………………………………….68
فصل پنجم: نتیجه گیری و پیشنهادات
5-1- بحث………………………………………………………………………………………………71
5-1-1- اثر عصاره افتیمون بر لاین سلولهای MCF7 و Vero………………………………………………………..71
5-1-1-1- شواهد موافق با این یافته ها…………………………………………………………………………………………71
5-1-1-2- مکانیسم پیشنهادی……………………………………………………………………………………………………..71
5-1-1-3- اثر غلظتهای مختلف افتیمون بر لاین سلولهای MCF7 و Vero………………………………….72
5-1-1-3-1- شواهد موافق با این یافته ها……………………………………………………………………………………..72
5-1-2- اثر قارچ گانودرما بر لاین سلولهای MCF7 و Vero…………………………………………………………73
5-1-2-1- شواهد موافق با این یافته ها…………………………………………………………………………………………73
ادامه فهرست مطالب
عنوان صفحه
5-1-2-2- مکانیسم پیشنهادی……………………………………………………………………………….74
5-1-2-3- اثر غلظتهای مختلف قارچ گانودرما بر لاین سلولهای MCF7 و Vero……………………………..75
5-1-2-3-1- شواهد موافق با این یافته ها……………………………………………………………………………………..75
5-1-2-3-2- مکانیسم پیشنهادی…………………………………………………………………………………………………75
5-2- نتیجه گیری………………………………………………………………………………………………………………………..77
5-3- پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………..77
منابع و مآخذ
منابع فارسی……………………………………………………………………………………………………………………………….78
منابع غیر فارسی…………………………………………………………………………………………………………………………81
چکیده انگلیسی
مقدمه و تعریف
سرطان پستان یکی از شایعترین انواع سرطان است که هر ساله باعث مرگ و میر فراوانی در بین زنان و مردان می شود و علیرغم پیشرفتهای بسیاری که در مورد تشخیص زودهنگام و درمان مناسب این بیماری صورت گرفته است کماکان سردسته علل مرگ به علت سرطان در بین زنان است (هوول و همکاران[1]، 2005). با اینکه هرروز راهکارهای جدیدتری در برخورد با سرطان پستان معرفی می شود ولی هنوز هم این بیماری جان عدهی زیادی را در معرض خطر قرار داده است، شاید توجه بیشتر به ساختار ریز مولکولی و اساس زیست شناسی این بیماری باعث شود تا بلکه بتوان با دانسته های بیشتری در مورد چگونگی پیدایش این بیماری از سطح سلولها اطلاعات گسترده تری در مورد ایجاد رشد و بیماریزائی این بیماری مهلک بدست آورد (مورفی و همکاران[2]، 2005). امروزه لزوم دانستن زیست شناسی سرطان پستان دیگر بر کسی پوشیده نیست و با توجه به اینکه جراحان در صف اول مبارزه با این بیماری قرار دارند، دانش بیشتر در این ضمینه بینش عمیقتر و دیدگاه وسیعتری را در اختیار جراح قرار میدهد تا در پیشگیری، تشخیص زود هنگام و درمان به موقع این بیماران گام موثرتری بردارد. سرطان بیماری سلولهاست بدن انسان مجموعه ای از سلولها است که هرکدام وظیفه خاصی بر عهده دارند تا بتواند عملکرد صحیح و سلامتی یک فرد را تضمین نماید، سلولهای بدن شهروندان خوبی هستند و علاوه بر انجام وظایف محوله به فضایی که توسط سلولهای اطرافیانشان اشغال می شود احترام میگذارند و درحفظ سلامتی یکدیگر کوشا و فعالند. اگر سلولی به صورت غیر قابل کنترل رشد و تکثیر یابد ایجاد مشکلات زیادی برای خود و سایرین خواهد کرد. سرطان در واقع رشد غیر قابل کنترل است، سلولهای سرطانی دیگر شهروندان خوبی نخواهند بود و نه تنها وظایفشان را انجام نمی دهند بلکه به همسایگان خود نیز احترام نمیگذارند و سلولهای طبیعی را تحت فشار قرار می دهند به حدود آنها تعدی می کنند و مواد مغزی آنها را جهت سوخت ساز لازم برای رشد تسریع یافته خود استفاده می کنند. تجمع یک گروه از سلولها در بدن را توده یا تومور مینامند. البته همه تودهها سرطان نیستند. تودهها به دو دسته خوشخیم و بدخیم تقسیم میشوند (میرمالک و الهام کنی، 1388). تودههای خوشخیم اغلب تهدید کننده حیات نیستند، مگر در شرایط خاص مثل تودههای مغزی که حتی اگر از نظر بافتی خوشخیم باشند خطرناک و بلکه کشنده خواهند بود. تودههای بدخیم یا سرطانی همیشه خطرناک هستند و تهدیدی برای حیات فرد مبتلا به حساب میآیند و قادرند به سایر اعضای بدن نیز دست اندازی کنند، پدیدهای که به آن متاستاز گفته می شود (استیل و اسمیت[3]، 1999). تومور ویلمز شایعترین تومور کلیوی دوران کودکی میباشد که 6 درصد بدخیمیهای اطفال را به خود اختصاص میدهد (برسلوو وهمکاران[4]، 1993). تقریبا 2/1 کودکان مبتلا به تومور ویلمز می تواند با ناهنجاریهای ارثی مانند انیدریا، ناهنجاریهای مجاری ادراری-تناسلی و عقب ماندگی ذهنی همراه باشد که از آنها به عنوان سندرم واگر (WAGR) نام برده می شود (فیلیپ[5]، 2011). بیماران مبتلا به سندرم واگر در دوران کودکی اغلب با انیدریا یکطرفه مراجعه می کنند اگرچه ناهنجاریهای ژنیتالی همیشه در این بیماران وجود ندارند اما همراهی این ناهنجاریها با انیدریا به خصوص در دختران می تواند شک پزشک را به وجود سندرم واگر برانگیزد (میلر و منینگ[6]، 1994). تومور ویلمز همچنان که ذکر شد شایعتری تومور در دوران شیرخوارگی و کودکی است که خود را با توده شکمی، هماتوری و به ندرت علائم متاستاز دور دست به خصوص به ریه را نشان میدهد روشهای درمانی برای این تومور شامل جراحی، شیمیدرمانی و رادیوتراپی به بستر تومور اولیه میباشد. با تشخیص سریع و درمان مناسب بیماران مبتلا به تومور ویلمز از طول عمر بالایی برخوردار خواهند بود (ارجمندی رفسنجانی و همکاران، 1383). همچنین یکی دیگر از شایعترین تومور کلیه آدنوکارسینوم سلولهای کلیه است که حدود 85 درصد کل تومورهای کلیوی را به خود اختصاص میدهد این تومورها به طور اولیه به استخوانها، کبد، مغز متاستاز می دهند (خواجوی راد و همکاران، 1389). لذا از دیر باز تاثیر عصارههای مختلف گیاهی در درمان بیماریها شناخته شده بود (سامی و تان[7]، 2000). این مطالعه به منظور بررسی اثرات عصارههای هیدرو الکلی افتیمون و قارچ گانودرما بر لاین سلولی MCF7 سرطان پستان و لاین سلولی Vero اپیتلیالی کلیه در محیط کشت انتخابی طراحی گردیده است تا امکان بررسی اثرات مهاری افتیمون و قارچ گانودرما بر تکثیر لاین سلولی MCF7 سرطان پستان و لاین سلولی Vero اپیتلیالی کلیه مورد بررسی قرار گیرد.
1-2- بیان مساله
1-2-1 گیاه افتیمون
گیاه افتیمون (Cuscutapentagona) یکی از معروفترین گیاهان پارازیتی از خانواده پیچک صحرایی است. این گیاه یکساله که در بهار میروید، به گیاهان میزبان خود حمله می کند. گیاه افتیمون با رگبرگهای زرد مایل به نارنجی فاقد ریشه بوده و برگهای خود را گسترش میدهد و برای دوام وتکثیر خود نیاز به اتصال به سایر گیاهان دارد. اخیرا نشان داده شده که برگهای آن مواد معطر گیاه میزبان را درک می کند. زمانی که روی میزبان مستقر شد تنه مو مانند آن دوبار دور ساقه میزبان میپیچد و ساقههای ریشه مانند مکنده را تولید می کند و به بافت میزبان نفوذ می کند و از ریشه آوندی گیاه برای جذب مواد غذایی و آب استفاده می کند. بررسی مولکولی اخیر نشان میدهد دو ژن آکواپورین LeAqp2) ،(TRAMP و آنزیم تغییردهنده دیوار سلولی (LeXTH1) در گوجه فرنگی در حمله ناموفق افتیمون بیان شده، اما نقش آنها در مکانیسم دفاعی مشخص نیست (جاستین وهمکاران[8]،2010). همچنین گیاه افتیمون از نظر طبیعت نسبتا گرم و خشک است و از نظر دارویی برای بیماریهای عصبی، جنون، مالیخولیا، سردرد، دردهای مفصل و سرطان نتایج خوبی نشان داده است، همچنین عصاره متانولی افتیمون عملکرد آنتیاکسیدانی دارد که بدن انسان را از آسیبهای اکسیداتیوی که به رادیکالهای آزاد نسبت داده می شود محافظت می نماید (حاج حسینی بابایی و همکاران، 2012). علیرغم پیشرفتهای مهم در تشخیص و درمان هنوز هم سرطان پستان از معضلات شایع زنان است. گرچه وجود داروهای مؤثری مانند تاموکسیفن 1 و رالوکسیفن 2 مدولاتورهای گیرنده استروژنی یا آنتیاستروژنها) ویا داروهای داخل توموری و لتروزول (ممانعت کننده های (Armidex) آناسترازول آروماتازی که به همراه اشعه درمانی و یا ادجوانت درمانی در طی 30 سال گذشته جان بسیاری از زنان مبتلا را نجات داده است، ولی معایب مختلفی از جمله عود موارد بیماری ناشی از متاستاز در چند ماه پس از درمان، اثرات ناشی از مصرف داروها بر روی متابولیسم گلوکوکورتیکوییدها و خطرات سرطان بعد از شیمی درمانی سرطان سینه سبب محدودیت استفاده از این سیستمهای درمانی شده است (لاورنس[9]، 2002). از سوی دیگر در سرطان کلیه هر چند که درمان از طریق جراحی، شیمی درمانی، هورمون درمانی یا اشعه درمانی میسر است که به کمک بیماران آمده است اما معایب مختلفی از جمله عود موارد بیماری ازجمله متاستاز در چند ماه پس از درمان اثرات ناشی از آنها سبب محدودیت استفاده از این سیستمهای درمانی شده است لذا از دیر باز تاثیر عصارههای مختلف گیاهی در درمان بیماریها شناخته شده بود (سامی و تان[10]، 2000).
تعداد صفحه :۱۰۶
قیمت 70 هزار تومان
70,000 تومانافزودن به سبد خرید